達(dá)坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細(xì)菌的多樣性分析及鈉離子輸出相關(guān)基因的克
論文摘要: 嗜鹽菌由于具有廣泛的環(huán)境（略）系統(tǒng)發(fā)育多樣性、獨(dú)特的耐鹽機(jī)制和潛在應(yīng)用價(jià)值,近年來受到科學(xué)界的廣泛關(guān)注.本研究以新疆達(dá)坂鹽湖沉積土壤為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)新疆達(dá)坂鹽湖的嗜鹽細(xì)菌進(jìn)行多樣性分析,并從中克隆獲得1個(gè)新的鈉離子輸出相關(guān)基因.主要研究結(jié)論如下: 以選擇性富集培養(yǎng)獲得的嗜鹽細(xì)菌基因組DNA為模板,擴(kuò)增16S rRNA基因,在此（略）鹽細(xì)菌的16S rRNA基因文庫,隨機(jī)挑選文庫中的100個(gè)陽性克隆子進(jìn)行群落結(jié)構(gòu)多樣性分析.16S rRNA基因序列分析結(jié)果表明:100個(gè)克隆分屬于細(xì)菌域9個(gè)屬的27個(gè)種,其中芽（略）cillus)為優(yōu)勢菌群(48%),喜鹽芽孢桿菌(Halobacillus) (14%)、嗜鹽單胞菌(Halomonas) (13%)為次優(yōu)勢菌群.分析的陽性克隆子中（略）子與GenBank中已報(bào)道16S rRNA基因序列的相似性在88.80%到96.90%之間,可能代表新屬或新種.研究結(jié)果表明,新疆達(dá)坂鹽湖沉積土壤的富集培養(yǎng)物中存在種類較為豐富的嗜鹽細(xì)菌. 以大腸桿菌Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因缺陷株Escheric（略）li KNabc為宿主,...
Halophiles living in high-salt environment, due to a wide diversity of environmental（omitted）n, phylogenetic diversity, uniqu（omitted）erance mechanisms and potential applica-tions in recent years widespread attention by the scientific community. In this study, Daban（omitted） in Xinjiang as materials deposited s（omitted）er to obtain directional halophilic microorganisms enriched total DNA as a template of the Daban salt（omitted）injiang diversity of halophilic bacteria, and a new sodium ion output ...
目錄:摘要 第4-5頁
Abstract 第5頁
目錄 第6-9頁
1 序言 第9-26頁
·極端微生物簡介 第9-11頁
·極端微生物的主要生物類群 第9-10頁
·嗜熱微生物和嗜冷微生物 第9頁
·嗜酸微生物和嗜堿微生物 第9-10頁
·嗜鹽微生物 第10頁
·嗜壓微生物 第10頁
·極端微生物的應(yīng)用 第10-11頁
·嗜鹽菌的研究概況 第11-16頁
·嗜鹽菌的定義和分類 第11-12頁
·嗜鹽菌棲息的鹽域環(huán)境 第12頁
·嗜鹽古菌的研究歷史 第12頁
·中度嗜鹽菌的研究歷史 第12-13頁
·嗜鹽菌的研究熱點(diǎn) 第13-16頁
·嗜鹽菌的分類學(xué) 第13頁
·嗜鹽菌的系統(tǒng)發(fā)育多樣性 第13-14頁
·嗜鹽菌的應(yīng)用 第14-16頁
·嗜鹽菌的生理學(xué) 第16頁
·嗜鹽微生物的鹽適應(yīng)機(jī)制 第16-23頁
·通過提高胞質(zhì)緩沖力來適應(yīng)高鹽環(huán)境 第17頁
·次級(jí)鈉泵系統(tǒng) 第17-23頁
·大腸桿菌中的Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 第17-20頁
·耐鹽菌和嗜鹽菌中的Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 第20-21頁
·嗜堿菌中的Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 第21頁
·其它類型微生物中的Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 第21-22頁
·NhaD Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 第22-23頁
·Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的應(yīng)用前景 第23頁
·微生物Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亟待研究的問題 第23-24頁
·本研究的指導(dǎo)思想、目的和意義 第24頁
·本研究的技術(shù)路線 第24-26頁
2 新疆達(dá)坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細(xì)菌的多樣性分析 第26-37頁
·材料和方法 第26-31頁
·樣品的采集和處理 第26頁
·主要儀器和實(shí)驗(yàn)用品 第26頁
·菌株和載體 第26頁
·培養(yǎng)基 第26-27頁
·主要試劑 第27頁
·DNA提取試劑 第27頁
·電泳相關(guān)緩沖液 第27頁
·實(shí)驗(yàn)方法 第27-31頁
·嗜鹽菌的定向富集 第27-28頁
·總基因組DNA的提取與純化 第28頁
·DNA濃度和純度的測定 第28頁
·PCR反應(yīng)體系和條件 第28-29頁
·PCR產(chǎn)物的純化 第29頁
·連接 第29-30頁
·熱激感受態(tài)的制備 第30頁
·熱激轉(zhuǎn)化 第30頁
·菌落PCR 第30頁
·DNA序列測定 第30頁
·S rRNA的系統(tǒng)發(fā)育分析 第30-31頁
·核苷酸序列登錄號(hào) 第31頁
·結(jié)果與分析 第31-36頁
·總基因組DNA的提取 第31頁
·嗜鹽富集培養(yǎng)物16S rRNA基因多樣性及其系統(tǒng)發(fā)育分析 第31-36頁
·嗜鹽富集培養(yǎng)物16S rRNA基因系列擴(kuò)增 第31-32頁
·嗜鹽富集培養(yǎng)物16S rRNA基因克隆文庫的構(gòu)建與多樣性分析 第32-36頁
·討論 第36-37頁
3 微生物鈉離子輸出相關(guān)基因的克隆與功能研究 第37-55頁
·材料與方法 第37-43頁
·樣品的采集和處理 第37頁
·菌株、質(zhì)粒和引物 第37-38頁
·主要儀器和實(shí)驗(yàn)用品 第38頁
·培養(yǎng)基 第38頁
·堿法提取質(zhì)粒所需主要試劑 第38頁
·實(shí)驗(yàn)方法 第38-43頁
·總基因組DNA提取、純化及濃度測定 第38頁
·總基因組DNA的部分酶切 第38-39頁
·載體的酶切和去磷酸化 第39頁
·載體與總基因組DNA部分酶切片段的連接 第39-40頁
·連接產(chǎn)物純化 第40頁
·電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備 第40-41頁
·電激轉(zhuǎn)化 第41頁
·質(zhì)粒的快速檢測 第41頁
·質(zhì)粒提取 第41-42頁
·鈉離子輸出相關(guān)基因的亞克隆 第42-43頁
·基因序列的生物信息學(xué)分析 第43頁
·重組子在不同條件下的生長能力測試 第43頁
·結(jié)果和分析 第43-53頁
·總基因組DNA的部分酶切 第43-44頁
·陽性克隆子的篩選 第44頁
·重組質(zhì)粒攜帶外源基因的序列分析 第44-51頁
·Na~+輸出相關(guān)基因的亞克隆 第51-52頁
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL的耐鹽性實(shí)驗(yàn) 第52頁
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL對(duì)堿性pH的抗性 第52-53頁
·討論 第53-55頁
結(jié)論 第55-56頁
參考文獻(xiàn) 第56-65頁
縮略詞一覽表 第65-66頁
致謝 第66-67頁
項(xiàng)目資助與論文發(fā)表情況 第67頁
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